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RNA退火缓冲液(5x) 江苑生物

¥80元/瓶 中国 江苏 南京 浦口区
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产品简介

  Annealing Buffer for DNA Oligos (5×),即 DNA 寡核苷酸退火缓冲液,该退火缓冲液不仅可以用于常规 DNA Oligos 的退火,而且特别适合于较难退火的构建 RNAi(siRNA 和 shRNA) 质粒的 DNA Oligos,可以有效避免 DNA Oligos 自身形成发夹结构,并且两条 Oligos 退火后可以直接和经酶切纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性。

保存条件

  常温配送。一个月内,4 ºC 保存。-20 ºC 长期保存,至少1年有效。

注意事项

1. DNA 退火缓冲液(5×)只适合于 DNA Oligos 的退火,不能用于 RNA Oligos 的退火。

2. 本产品仅用于科学研究,不得用于临床诊断和治疗,不得用于食品和药品,不得存放于普通住宅内。

使用说明

1.将 Oligos 干粉用双蒸水配制成 50 µM,融化 DNA 退火缓冲液(5×) ,混匀备用。

2.配置如下退火反应体系,混匀。

Nuclease-Free Water      µL    

DNA 退火缓冲液(5×)     20 µL    

DNA Oligo A (50 μM)     20 µL    

DNA Oligo B 0 μM)     20 µL    

总体积     100 µL   

3.退火方法一: 将退火反应体系置于 PCR 仪中, 设置反应条件: 95℃变性 2 min, -1℃/30s/cycle 缓慢降温至 25℃。 程序设置以 Bio-Rad 的 T100 为例为: 1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 0:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2,70X; 4. 4℃, ∞。

    对于易形成发卡结构的 Oligos 可以延长时间降温时间: 95℃变性 2 min, -1℃/90s/cycle 缓慢降温至25℃。 程序设置以 Bio-Rad 的 T100 为例为: 1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 1:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2,70X; 4. 4℃, ∞。

4.退火方法二: 将退火反应体系放于 95°C 水浴锅或金属浴, 持续 2 min,后将退火反应体系置于一杯 95°C的水中,让其自然冷却至室温。 若是易形成发卡结构的 Oligos,可以将95°C 水放于保温杯中开盖降温。
   Note: 缓慢降温对形成正确的结构是非常有帮助的,降温过快将导致错误结构的产生。

5.退火结束后可直接用于连接反应,也可以-20ºC 冻存备用。 若进行酶切等其它反应,更好用纯化盒进行纯化,或者确保退火产物在反应体系中体积不超过 5%,以避免退火缓冲液对后续酶反应体系的干扰。

6.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

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以上内容为RNA退火缓冲液(5x) 江苑生物,本产品由南京江苑生物科技有限公司直销供应。
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