美国出版协会(AAP)于1998年创建了DOI以来,制定了标准,并建立了相应的解析系统,目前在出版界得到了广泛和成功的应用。DOI已用于期刊、电子书、技术报告、标准等各种文献类型的标识,并向与文献相关的科学数据、版权、甚至作者标识等多元化方向发展。截止2008年4月底,DOI的注册量已超过了3,000多万个,应用DOI的出版社和学会有2,500多家,图书馆1,300多个。万方数据公司已获得了在中国注册DOI代理机构权。
由于改良免0疫法只需二次基础免0疫而常规免0疫法则需要2倍于改良法的免0疫次数,所以改良法*原用量明显少于常规法,从而大大减少了实验成本的消耗。
此外,本实验通过对比两种免0疫方法的细胞融合率及*0体阳性率,发现改良免0疫法均显著高于常规免0疫法。
经过后续实验,证明改良法免0疫小鼠的杂交瘤细胞经二次克0隆化后,*0体阳性率可达检测孔的90%以上。杂交瘤细胞体外连续传代培养,并冻存复苏后仍具有分泌AFP—McAb的能力,并经染色体计数结果表明已成功获得一株AFP—McAb细胞株。这表明改良法与常规方法具有同样的有效性和稳定性。
1. 第21天按同样方式加强免0疫1针。备注:每次佐剂和*原现配现用。
2. 第35天采微量血进行ELISA测定,*0体滴度应在1:10000-1:10000000范围内,随后即可采全血或按常规方法进行*原冲击免0疫和脾细胞融合。
3. 若*0体滴度没有达到要求,可在第42天按同样方式加强免0疫1针。备注:通常情况下小鼠只需免0疫2针,而家兔往往需要免0疫3针。
4. 若免0疫3针,弗氏完全佐剂,可在第52-56天采微量血进行ELISA测定,*0体滴度应在1:10000-1:1000000范围内,随后即可采全血或按常规方法进行*原冲击免0疫和脾细胞融合。备注:佐剂免0疫效果有时也与*原特性有关,若免0疫3针后仍达不到要求,不建议进行更多针次免0疫。