OPD底物显色一般在室外温或37℃反应20-30min后即不再加深,再延长反应时间,可使本底值增1高。OPD底物液受光照会自行变色,显色反应应避光进行,显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD产物用*终止后,显色由橙*转向棕*。
TMB受光照的影响不大,可在室温中置于操作台上,边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性,宜在规定的适当时间阅读结果。TMB经HRP作用后,约40min显色达*,随即逐渐减弱,至2小时后即可完全消退至无色。TMB的终止液有多种,叠氮钠和十二烷基*钠(SDS)等酶*1剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间(12-24小时)不褪,是目视判断的良好终止剂。此外,各类酸性终止液则会使蓝色转变成*,此时可用特定的波长(450nm)测读吸光值。
****测定技术的基础在于*原*1体之间的特异结合反应,所以任何****的诊断1*离不开****的原料,如*原*1体,酶等。以前用于****测定的*原通常为各种纯化*原,而*1体则为纯化*原****动物后获得的多克1隆*1体和使用杂交瘤技术得到的单克1隆*1体,而*原或*1体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来,随着分子生物学的发展,使用*工程方法制备各种特殊的*原或*1体及其酶结合物等****测定*几成为现实的新一代*,各种新型使用的测定方法也不断出现。
血1清
血1清是常用于ELISA检测的一类样本,处理也比较简单。
用无热原、无内毒1素的试管或离心管采集血液标本,将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜,人elisa*盒价格,使血1清析出。(将试管或离心管倾斜放置,使液面横截面*,能使血1清更大程度的析出。)4℃1000×g离心20min,仔细收集上清。建议将血1清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
采血过程中应避免溶血,因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。同时也应避免*污染,因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。