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（2） 包被*1体（或*原）的选择：将*1体（或*原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好，吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响，一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的****适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值****1大而蛋白量****少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。（3）　酶标记*1体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记*1体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记*1体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

IgM*1体的检测用于传1染病的早期诊断中。间接法ELISA一般仅适用于检测总*1体或IgG*1体。如用*原包被的间接法直接测定IgM*1体，因标本中一般同时存在较高浓度的IgG*1体，后者将竞争结合固相*原而使一部份IgM*1体不能结合到固相上。因此如用*人IgM作为二*，间接测定IgM*1体，必须先将标本用A蛋白或*IgG*1体处理，以除去IgG的干扰。在临床检验中测定*1体IgM时多采用捕获包被法。先用*人IgM*1体包被固相，以捕获血1清标本中的IgM（其中包括针对*原的特异性IgM*1体和非特异性的IgM）。然后加入*原，此*原仅与特异性IgM相结合。继而加酶标记针对*原的特异性*1体。再与底物作用，呈色即与标本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性1感1染的早期诊断。甲型肝1炎病毒（HAV）*1体的检测模式见图2-7。

　2. 标准曲线线性不佳，或是平行性不好。

　　a.原因：温育位置避光不好或受到气流干扰。

　　解决办法： 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。

　　b.原因：操作时间拖太久。

　　解决办法：请在方法熟练后再进行操作。

　　c.原因：微孔间相互污染。

　　解决办法： 加样品时，请小心勿溅出微孔外，以免造成其它微孔的污染。

　　d.原因：标准品或酶标记物所加入的量不一致。

　　解决办法：请使用已校正过的移液枪，并确保其与吸头之间有高度密合性。

　　e.原因：添加样品或*的操作方法不正确。

　　解决办法：加样品或*时，吸头请勿接触微孔。

　　f.原因：洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。

　　解决办法：请随时监控洗板1机洗板过程，洗完后立即进行下一步骤。

　　3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)。

　　a.原因：室温太高(gt;25℃)。

　　解决办法： 若无法降低室内温度，请适当缩短步骤4的温育时间。

　　b.原因：底物溶液受到污染。

　　解决办法： 若发现底物溶液已呈现淡蓝色，请不要再使用。

　　c.原因：反应时间超过太久。

　　解决办法：请控制反应时间。

　　d.原因：酶标记物污染了盒内其它*。

　　解决办法：使用过的吸头应立即丢弃，可避免*间相互污染，凡是*(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以*白水浸泡，鼠ELISA*盒价格，再以清水冲洗干净，可确保无残留)

　　4. 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。

　　a.原因：微孔中的*未能充分混合。

　　解决办法： *加完后，需轻敲盘四周使其充分混合均匀。

　　b.原因：洗板过程发生问题(同2-f.)。

　　解决办法：请参考2-f.

　　c.原因：添加样品或酶标记物的量不一致。

　　解决办法： 请参考2-d.