冷冻切片法

冷冻切片法是借*在低温下，*变硬而达到符合切片要求。冷冻切片法需有冷冻切片机，或在普通切片上配制冷设施。恒冷切片机是*冷冻切片设备。它有一个恒冷箱，标本致冷台和切片机都装在箱内。恒冷箱的作用类似冰箱，可在一定范围内调整温度，其结构有利于保持箱内恒定低温，减少箱门打开时环境温度的干扰。切片机的轮转把手装在箱外，便于操纵切片。

冷冻切片法的优点是：在处理得当时，它可以****限度地保持*的新鲜状态。并且，由于不需经脱水、透明、浸蜡等过程中*的处理，及湿箱浸蜡热的影响，甚至可不经固定。所以能很好地保存*细胞的各种成分和酶的活性，因此在酶的*化学研究中常用此切片法。

空腔*：食管、胃、肠等应*剖开，黏膜面向上平铺于软木板上，并用大头针将标本边缘钉于木板上，再放入固定液中，黏膜面覆盖脱脂棉或纱布，或黏膜面向下浸与固定液中。

脑：整体脑*固定时，闹底向上，先将一长缝合线穿过脑基底动脉环，然后双手捧着脑*放入已注入固定液的容器中，再将缝合线两头轻轻向上提起，借助于水的浮力使脑*悬浮于固定液中，然后将缝合线固定于容器壁上。脑*固定所需时间较长，一般为10-15天，固定1周时应更换一次固定液。

眼球：眼球表面结构致密，固定液不宜渗入，固定时应先经*直径做一个矢状切口，切开*，将小纸片卷成一定厚度插入该切口，使固定液由此切口进入眼球内，以利固定。

非整体*的小*直接用足量固定液固定即可。

脱水

　　①以上各级乙醇脱水时间可根据*块的大小适当调整。对于小的*块（如胃黏膜、支气管粘膜等）可适当减少脱水时间，对于较大的*块可适当增加脱水时间，但各级乙醇****长不要超过12h，无水乙醇不要超过4h。如中途因故不能继续进行下去，则可将标本退回至80%乙醇中保存。另外，脂肪*和疏松结缔*一般应延长脱水时间，在95%乙醇中水分必须脱净，脂肪必须溶解掉（50%以上浓度的乙醇可溶解脂肪和类脂质）。否则，石蜡不能渗入脂肪细胞和纤维*，无法切出好的切片，而且染色时也易脱片。

　　②若*含水分过多（如胚胎*），则脱水剂浓度应由更低级乙醇（如30-40%乙醇）开始，这对保证制片质量十分重要。

　　③若脱水不尽，切片后蜡块切面*常出现凹陷（因蜡块中包埋的*与空气接触后即干燥收缩）。这样的蜡块，虽能勉强切出切片，但染色效果****差，染色时*也容易脱落。因此，脱水必须*，脱水*与否是制片质量好坏的一个重要环节。

　　④脱水剂的容积应为*块总体积的5-10倍，脱水剂应及时过滤，更换。