制作方法
脱水:是将*细胞所含水分除去。通常用乙醇(Alcohol,酒精),浓度递升到 100%。此过程还使*块进一步硬化。
透明:是用既能溶于纯酒精又能融解石蜡的*,将*中的酒精取代,以便石蜡浸入。通常用*(xylene)为透明剂。
浸蜡:在温箱内进行。已透明的*块放入加热融解的石蜡中,让石蜡浸透*,作为支持介质。
包埋:将已浸蜡的*块放入热融的包埋石蜡中,迅速冷凝,*决便被蜡包埋。
切片:用切片机。常用的切片机有轮转式、平推式的。用轮转式的易于切出连续切片。切片厚度随制片目的而调整。教学标本厚度多是5~6μm。
贴片烤干:石蜡切片在温水上展平后,移在玻片上,烤干,即可供染色处理。染色后用树胶、盖坡片封固,可*保存。
透明:因脱水剂不能与包埋介质相溶,因而包埋前应用能与包埋介质相溶的化学*将*中的脱水剂置换出来,该过程即为透明。在这个过程中,*快中的乙醇被媒介溶剂(即透明剂,如*)取代,因其折光率接近*蛋白的折光率,光线可以透过,使*块呈现不同程度的透明状。
*为无色透明液体,透明能力强,但易使*块收缩、变硬变脆,因此*块在*中时间不宜过长,以达到*透明为度(*块呈现棕*或暗*透明状即可)。另外,苯、*与*性质相似,也可作透明剂使用。二者对*块收缩较少,不易使*硬化变脆,但透明速度慢,需要60min左右。****的透明能力不如*,且挥发快,容易吸收水分,多用于大*块(厚1cm)的透明,透明时间为12-24h。
石蜡包埋切片的HE染色法
分色后用自来水或加数滴氨水碱化,直至细胞核变成蓝色。这一步骤也可称为“蓝化”。
入蒸馏水洗去碱性水分。
入70%酒精→80%酒精各5分钟。
入伊红染液染色30秒至数分钟。
以95%酒精对伊红分色,至胞浆,结缔*等呈桃红色。
上行脱水:染色后的切片,因*内含水而不透明,不能清晰地观察其微细结构。因此,须将*内的水分经各级酒精→无水酒精逐步置换,****后进入不含水份的透明剂内。
透明:入*透明剂,二次(各数分钟)。
取出切片:将*周围多余的*擦去,滴树胶后加盖玻片封固。
结果:细胞核蓝紫色,胞浆、胶原纤维、肌纤维为桃红色,嗜酸性颗粒为鲜红色,弹性纤维呈明亮桃红色。