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在高i效液相色谱分析中,常采用和配制流动相。常用的高i效液相色谱法*至好是*,如色谱纯化*等。当要求不太严格时,纯级甚至是分析纯的*都可以使用。紫外检测器是常用的高i效液相色谱分析方法,因此,应从降低基线噪声和提高分析灵敏度的角度考虑,采用紫外吸收小、杂质少的纯紫外吸收剂。
1.过滤流动相。在使用前,准备好的流动相要用0.5 um口径的微孔滤膜进行过滤。因为溶液中含有许多用肉眼很难发现的微粒,液相消耗品南区总代理,如果不滤除它们,泵口、柱头上的过滤器就会堵塞,从而阻塞了流动相的正常通道,使色谱柱的阻力*,柱效降低。遇到此情况时,换用过滤过的流动相,拆开堵塞过的过滤器,浸在20%的水溶液中,用超声波清洗机清洗20分钟,以除去滤片上的堵塞。
2、流动相的脱气。在使用之前,必须先除气,以便尽可能地去除溶解在流动相中的气体,液相消耗品,否则,这些气体会使柱填料的性能下降,并对检测器的信号产生较大的干扰。目前,各种脱气方法有超声波脱气、真空脱气、氮气脱气等。目前应用至多的是真空脱气法和氮气流法。在无气状态下,水与混合时会产生大量的气泡,气泡会进入色谱柱和检测器中,影响分析工作的正常进行。
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储存色谱柱。如暂时不使用色谱柱,应注意下列事项:
A.在短时间内的放置过程中,首先要用溶剂冲洗色谱柱(如用蒸馏水冲洗凝胶柱),然后用密封螺钉将色谱柱的两头密封。
b.如果色谱柱长时间不使用,则不能单用上述方法处理,当使用说明书中指i定的溶剂向色谱柱注满色谱柱,反相柱一般用甲i醇,正相柱可用正已烷或*,凝胶柱不能用水,因为柱中有微生物生长则会使柱效降低,此时应用0.05%的 NaNs水溶液(防腐剂)再将色谱柱进行冲洗。长时间放置色谱柱时,必须确保色谱柱两端密封紧,防止溶剂挥发所致的柱填料干缩现象,因为这会导致柱效严重下降。
C.色谱柱应储存在室温下,液相消耗品售后代理,如果放置在0℃以下的环境中,色谱柱会被*,这也会导致柱效下降。
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高i效液相色谱高i效液相色谱常见类型有哪些?
其中两种至常见的高i效液相色谱为正相高i效液相色谱和反相高i效液相色谱。
正相高i效液相色谱:
柱子中填充微粒二氧化硅和非*性溶剂,如*。一个典型的柱长在150到250 mm之间,其内径小于4.6毫米。由于*性化合物在*性二氧化硅表面的粘附时间较长,混合物中的非*性化合物通过色谱柱的速度加快。
反相高i效液相色谱:
在柱子中填充二氧化硅粒子,液相消耗品广东总代理,并对其进行改性,使长碳氢链(8~18个 C原子)附着在表面,从而达到非*性。用*性溶剂,如水、醇、甲i醇等。因为在*性溶剂和*性分子之间有很强的吸引作用,混合物中的*性化合物会更快地穿过色谱柱。在通过色谱柱时,非*性分子的速度减慢。他们对烃基的吸引主要是通过范德华分散力和疏水作用产生不同程度的吸引。其在流动相中的溶解度也较低,这有助于它们与烃基的相互作用。
反相高i效液相色谱是目前使用至广泛的高i效液相色谱技术。
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