液相色谱法的常见问题

样品准备是成功的关键；在将所有样品加载到自动进样器中之前，必须对所有样品进行过滤，色谱价格，这一点非常重要。当使用UHPLC时，如果不过滤样品，使用亚2微米颗粒的色谱柱进行*分离时很容易发生阻塞，这一点就尤为重要。对于流动相也是如此，尤其是在使用缓冲区的情况下。

对于样品使用正确的进样溶剂或稀释剂至关重要，溶剂强度应等于或小于流动相起始条件的强度。如果使用太强的溶剂，则会观察到峰分裂和重现性差。如果自动进样器中使用的清洗溶剂太强，可能会观察到类似的问题。

液相色谱的分离过程

同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，色谱哪个稳定性好，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。

不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。

其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

实验室级别的制备液相色谱主要用于以下领域

1.天然药品化学、中药化学。这是国内目前广泛的使用方法，为了弄清楚植物中的微量有效成分，开放手工色谱柱早已不够用了，几乎每个搞天然药化的实验室都至少有一台液相，土豪实验室人手一台液相。

2.蛋白纯化。相对于前者，蛋白纯化的起步要稍微晚一点，但是发展很迅速。同时，由于外国仪器厂家在这个领域的优势不算太大，目前国内也在这个领域加快发展，色谱批发价格，抢占地盘。

3.药品杂质纯化。由于合成工艺并不能做到100%的产率，天津色谱，往往伴有副产品，如何获得微量的杂质并确定结构和含量，这就得靠液相色谱。

4.手性化合物的制备。这个主要是有机合成和方法学的在用。