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RPA的原理;

重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。




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核酸提取技术亦可分为2部分,lt;样本裂解gt;与lt;核酸纯化gt;,目前市面上常见的样本裂解技术有lt;物理加热裂解gt;、lt;蛋白酶K裂解gt;、lt;一步法核酸提取gt;,核酸纯化技术有lt;梯度离心法gt;、lt;硅胶模柱法gt;、lt;磁珠法gt;。因此对于核酸提取技术的不同,样本裂解及核酸纯化环节不尽相同,TwistAmp basic报价,操作繁琐程度不同,提取效率、核酸的纯度亦会不同。而复杂的操作更易导致气溶胶污染,带来风险。因此,选择合适的提取技术,对当前疫情防控至关重要。




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RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,反应温度在37°C左右。

重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,TwistAmp basic公司,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,TwistAmp basic价格,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。RPA扩增的基础体系(TwistAmp? Basic)含有DNA扩增所需的所有*,我们只要准备好引物和模板就行。扩增结果可以通过凝胶电泳进行终点检测,产物纯化后可用于下游研究。

在这个基础体系中添入不同的酶和探针,TwistAmp basic,就可以实现多样化的RPA应用。举例来说,TwistAmp? exo结合了exo探针技术和核酸外切酶III,能实现数据的实时读取,就像荧光定量PCR一样。不过反应终点的扩增子总量有所减少,适合获得强荧光信号进行动力学分析,不适合终点检测(比如跑胶)。将exo探针技术、核酸外切酶III和逆转录酶结合起来,可以一步实现RNA模板的实时扩增。




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