20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的*钠水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套)
三羟Tris是生*学领域应用很广泛的一种缓冲剂,cas号77-86-1,具有性质稳定不参与生化过程、缓冲能力强等优点,被广泛用于蛋白质和核酸相关的检验。由于Tris的用量很大很广泛,一些细节也需要注意,Tris缓冲液虽然缓冲能力强,但稀释过大或者反应体系体积变化大的时候,需要慎重使用Tris,稀释十倍的话篇pH变化大于0.1,*盐缓冲液则pH变化小于0.1。
Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂,还有许多重要用途。Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫(C. elegans)核纤层蛋白(lamin)的中间纤维的形成。Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。此外,高纯度三羟甲基*盐酸盐价格,Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些的中间物。Tris也被用作滴定标准物。缓冲特性Tris为弱碱,在室温(25℃)下,它的pKa为8.1;根据缓冲理论,Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。Tris碱的水溶液pH在10.5左右,一般加入盐酸以调节pH值至所需值,即可获得该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于Tris的pKa的影响。