洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的*缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
底物是光敏感的,要在临用前现配。
检测前,要打开酶l标仪,使之稳定10分钟以上。
底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。
待检样品要澄清,否则会影响结果。
温浴时间应遵守*盒规定。
应尽量做双孔实验,这样才能保证数据的准确性。
对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
ELISA检测*盒应用定性夹心免l疫检测技术,用合成的HEV多肽*原包被微孔板板条,这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中*原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM*l体,这些*l体就会与HEV 的多肽*原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性*l体和样品中的其它成份。然后加入羊*人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与头一次孵育结合上的HEV IgM*l体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM*l体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入*溶液终止酶和底物间的反应,并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM*l体elisa*盒的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。