液相色谱仪的常规操作及维修：　　1、过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。　　2、对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。　　3、打开HPLC工作站，连接好流动相管道，连接检测系统。　　4、进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。　　5、有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。　　6、调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。　　7、设计走样方法。点击file，选取se-lectusersandmethods，可以选有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a、进样前的稳流，一般2-5分钟；b、基线归零；c、进样阀的lo*g-inject转换；d、走样时间，随不同的样品而不同。　　8、进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击trun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。　　9、关机时，先关计算机，再关液相色谱。


制备型加压液相色谱，按照色谱柱和样品量的大小，分为：（1）低压液相色谱；（2）中压液相色谱；（3）高压液相色谱；（4）快速色谱。低压、中压与高压液相色谱的压力范围之间会存在一定交叠，没有统一、明确的标准。 快速色谱柱压通常为2bar（或30psi）左右，对于那些容易分离的简单混合物，由于快速色谱具有操作简便、经济等优点，常常是实验室的佳选。但快速色谱不同于一般的层析分离，这种分离没有压力，而快速分离通常使用瓶装氮气加压，使流动相具有一定的流速，从而缩短了分离时间。 快速色谱使用的柱子一般是玻璃柱，高压制备，柱直径为3～10cm．长度为7～15cm。快速色谱中使用广泛的固定相为硅胶。采用的粒径通常为：25～40μm，40～63μm或63～200μm的球形固定相。其它如键合相、氧化铝、聚酰胺吸附剂也常用作快速色谱的固定相使用。


色谱柱是HPLC系统非常关键的一部分，随着色谱技术的发展，它也不断地更新换代，长度变得越来越短，填料颗粒也越来越细。现在常用的色谱柱长度在30～250 mm，颗粒直径在1.6～5μm。颗粒类型主要有全多孔和表面多孔，全多孔填料具有更大的柱容量、更多键合相选择的优点，表面多孔具有反压低、峰形好的优点。的基质是硅胶。以前填料纯化技术不是很成熟，十八烷基键合到硅胶表面不是很完全，硅胶上总是少量的硅羟基在外面。这样就造成样品在进行色谱分离的时候，会吸附或者键合在这部分硅羟基上，导致色谱峰拖尾。使用*作为封尾剂，与硅羟基吸附，可以使峰型改善，这个*曾经一度成为分析界的宝贝和。现在，制造填料的技术日趋成熟，人们已经掌握了把这部分剩余未键合硅胶也进行键合钝化的技术，这个技术就叫作封尾。



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