杂交技术*重要的因素之一是选择*适的杂交反应温度。若反应温度低于Tm 10～15℃，碱基顺序高度同源的互补链可形成稳定的双链，错配对减少。若反应温度再低（Tm-30℃），虽然互补链之间也可形成稳定的双链，但互补碱基配对减少，错配对增多、氢键结合的更弱。如两个同源性在50%左右或更低些的DNA，调整杂交温度可使它们之间的杂交率变化10倍，因此在实验前必须首先确定杂交温度。通常有三种温度可供试验，即*适复性温度、苛刻复性温度及非苛刻复性温度。温度的选择及温度对杂交的影响见表18-3。

*适复性温度（Optimunm renaturation temperature， TOR）：Tor =Tm –25℃

苛刻复性温度：Ts = Tm – (10或15℃)

非苛刻复性温度：Tns =Tm – (30或35℃)

原位杂交 (ISH) 是用于定位固定组织和细胞中特定核酸靶标的强大技术，原位杂交，能够获得与*表达和遗传位点相关的时间和空间信息。 虽然ISH的基本工作流程与印迹杂交近似，即核酸探针被合成、标记、纯化和特异性靶标退火，但其不同之处在于前者可通过可视化显示组织内的结果来获得更多信息。 如今有两种基本方法来实现可视化显示原位RNA和DNA靶标，即荧光 (FISH) 和显色 (CISH) 检测。 每种检测方法本身的特点（见下表）使得FISH和CISH适用于截然不同的应用。 虽然两种方法均使用标记的、与样本杂交的靶标特异性探针，但每种方法用于可视化显示样本的仪器不同。 这里我们将强调每种方法的不同之处和各自的优势。

武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、*、细胞等生物实验。

使用分支DNA信号扩增的RNA FISH

Invitrogen? ViewRNA?和PrimeFlow?检测是使用分支DNA信号扩增 (bDNA) 来检测特异性信号的直接荧光RNA ISH方法。 使用*但兼容的信号扩增系统让RNA靶标的多重复用成为可能。 荧光RNA原位杂交检测分为四个主要步骤：样本制备、靶标杂交、信号扩增以及检测。 该方法可实现更高的特异性，更低的背景值和更高的信噪比。

原位杂交-武汉思特进公司(图)由武汉思特进科技发展有限公司提供。行路致远，砥砺前行。武汉思特进科技发展有限公司致力成为与您共赢、共生、共同前行的战略伙伴，更矢志成为办公、文教项目合作具有竞争力的企业，与您一起飞跃，共同成功!