取材与标本固定
1. 取材 对于原位杂交所用的材料要尽可能新鲜,为了防止RNA的降解,取材要迅速,取材后要尽快固定或冷冻保存。
2.固定 进行原位杂交的*或细胞必须经过固定处理,固定的目的是为了①保持细胞形态原有结构;②保存细胞内的DNA或RNA的水平;③使探针易于进入细胞或*内。
3.固定液 常用固定液有10%甲醛、4%*、冰醋酸-酒精混合液、Bouin氏固定液等。这些固定液都有不同的优缺点因此要根据具体的实验对象,选择的固定液。
4.固定方法 *标本取材后,迅速放入固定液中2~4h,取材*大小为1cm×1cm×0.5cm,不宜太大。必要时,动物*可进行灌流固定,原位杂交,然后将*按要求取材放入2*中,4℃过夜,次日可行冰冻切片。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、*、细胞等生物实验。
多彩色荧光原位杂交(Multicolor fluorescence in situ hybridization,mFISH)是在荧光原位杂交技术的基础上发展起来的一种新技术,它用几种不同颜色的荧光素单独或混合标记的探针进行原位杂交,能同时检测多个靶位,各靶位在荧光显微镜下和照片上的颜色不同,呈现多种色彩,因而被称为多彩色荧光原位杂交。原位PCR技术是常规的原位杂交技术与PCR技术的有机结合,即通过PCR技术对靶核酸序列在染色体上或*细胞内进行原位扩增使其拷贝数增加,然后通过原位杂交技术进行检测,从而对靶核酸序列进行定性、*和定量分析。原位PCR技术大大提高了原位杂交技术的灵敏度和专一性,可用于低拷贝甚至单拷贝的**,为原位杂交技术的发展提供了更广阔的发展前景。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、*、细胞等生物实验。
原位杂交技术(In situ hybridization,ISH)是分子生物学、*化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术,始于20世纪60年代。1969年美国耶鲁大学的Gall等(1969)首先用爪蟾核糖体*探针与其卵母细胞杂交,将该*进行*,与此同时Buongiorno—Nardelli和Amaldi等(1970)相继利用同位素标记核酸探针进行了细胞或*的**,从而创造了原位杂交技术。自此以后,由于分子生物学技术的迅猛发展,特别是20世纪70年代末到80年代初,分子、质粒和噬菌体DNA的构建成功,为原位杂交技术的发展奠定了深厚的技术基础。