武汉思特进科技发展有限公司

主营：动植物，，细胞生物实验

亚细胞*-思特进科技发展公司

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武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、*、细胞等生物实验。

*转运蛋白P-type ATPase(HMA)已被证实参与植物体内的*运输，HMA5主要参与铜的转运。在模式植物拟南芥、水稻和黄瓜中对HMA5*进行了较多的研究，但是对豆科植物HMA5的研究鲜见报道。实验室前期在天蓝苜蓿中分离到一个与铜胁迫及共生结瘤相关的HMA5*，为了对此类*在豆科植物共生结瘤中的作用进行深入研究，本研究对全*组已测序的模式豆科植物蒺藜苜蓿的*组进行筛查，寻找HMA5同源*并通过表达模式分析初步判断其与共生结瘤的关系，在此基础上，以其中的MTR_8g079250*为对象，进行亚细胞*、*表达、RNA干扰和过量表达等研究，初步鉴定该*在共生结瘤中的功能。1、MTR_8g079250的亚细胞*构建MTR_8g079250的洋葱表皮亚细胞*载体，通过*枪轰击转化洋葱表皮细胞，在激光共聚焦显微镜下观察到MTR_8g079250::GFP融合蛋白主要在细胞膜上表达，在细胞核上也有微量的表达；构建MTR_8g079250的叶片亚细胞*载体，通过根*农介导注射叶片的方式进行转化，亚细胞*，结果表明目的*主要*在细胞膜和细胞核上；2、MTR_8g079250的*表达构建PMTR_8g079250::GUS融合表达载体，通过农发根转化的方式转入蒺藜苜蓿根部，经培养后，进行GUS染色观察。

选取含有氯嘧磺隆*性标记的ILV1*和报告*GFP二元载体的农AGL-1，采用单因子和双因子方法研究根*农AGL-1介导柱花草菌CH008转化过程中各主要因素对转化率的影响，优化构建ATMT转化柱花草胶孢菌体系条件，使转化效率达到300～400个转化子/106个孢子，即根*农AGL-1浓度OD600=0.8，菌分生孢子浓度为1×106个/mL，AS浓度为100 μmol/L，诱导时间为6 h，共培养温度和时间分别为25 ℃和4 d。经PCR检测都有GFP片段，并能够表达绿色荧光蛋白。这为进一步开展菌对柱花草的致病机理研究提供了依据，优化转化体系有利于后续突变体库的扩大、筛选突变体和致病功能*的研究。

通过比较不同侵染液浓度、侵染时间、取材部位、预处理等条件下的转化效果，优化了农介导的洋葱鳞茎内表皮细胞转化系统，并且成功检测到大蕉ASR蛋白(MpASR)与GFP的融合蛋白在洋葱表皮细胞中的分布。

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