温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃（冰箱温度）等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数*原*1体结合的合适温度。在建立ELISA方法作反应动力学研究时，两次*原*1体反应一般在37℃经1-2小时，产物的生成可达*。为加速反应，可****反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。*原*1体反应4℃更为*，在放1射****测定中多使反应在冰箱中过夜，以形成多的沉淀。但因所需时间太长，在ELISA中一般不予采用。

（2）流水冲洗式：流水冲洗法初用于小珠载体的洗涤，洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置，使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗，持续冲洗2min后，吸干液体，再用蒸馏水浸泡2min，吸干即可。浸泡式犹如盆浴，流水冲洗式则好比淋浴，其洗涤效果更为*，且也简便、快速。已有实验表明，流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压，让水流冲击板孔表面，洗涤效果更佳（此方法*盒较少采用）。

微量滴定板多采用浸泡式洗涤法。洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚本乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的，非离子型洗涤剂既含疏水基团，也含亲水基团，其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合，兔elisa*盒，从而削弱蛋白质与固相载体的结合，并借助于亲水基团和水分子的结合作用，使蛋白质回复到水溶液状态，从而脱离固相载体。洗涤液中的非离子型洗涤剂一般是吐温20，其浓度可在0.05%-0.2%之间，高于0.2%时，可使包被在固相上的*原或*1体解吸附而减低试验的灵敏度。