血1清

血1清是常用于ELISA检测的一类样本，处理也比较简单。

用无热原、无内毒1素的试管或离心管采集血液标本，将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜，使血1清析出。（将试管或离心管倾斜放置，使液面横截面*，能使血1清更大程度的析出。）4℃1000×g离心20min，仔细收集上清。建议将血1清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

采血过程中应避免溶血，因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质，在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色，而导致检测的不准确性。同时也应避免*污染，鱼ELISA*盒，因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。

细胞裂解液

1) 吸去培养板内的培养基，用胰酶消化细胞，加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。

2) 收集细胞悬液，1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。

3) 加入适量的预冷PBS或细胞裂解液（临用前加入蛋白酶抑1制剂）重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。

4) 将样品放入-20℃或-80℃，使样品冷冻，再放室温解冻样品，反复冻融几次，使细胞充分裂解。也可将样品进行超声*碎，以达到裂解的目的。

5) 4℃10000×g 离心10min，除去细胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

3．工作浓度的选择

　　在****酶技术中，首先要确定的变异因素就是酶标记物的工作浓度。因为酶标记物浓度的很小变化，便可导致试验结果产生很大的波动。另外，由于浓度过高，可使非特异性反应增加，而浓度过低又可影响测定的敏*。因此，正式试验前必须准确滴定其工作浓度。

　　酶标记*1体的滴定方法是：将*原(或*1体)物理吸附于固相载体上，然后将经过一系列稀释的酶标*1体(或*Ig*1体)与吸附在载体上的*原(或*1体)起反应，以酶与底物的显色反应程度来确定酶标记*1体的效价，或称工作浓度。

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