武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种*1体、****学*盒、生化*、ELISA*盒、分子生物学*等多用途多属种的*产品，服务涉及分子生物学、细胞生物学、****学等生命科学领域。

3、 细胞培养上清

取细胞培养上清到离心管，1000×g离心20min，除去细胞碎片及杂质，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

4、 细胞裂解液

1） 吸去培养板内的培养基，用胰酶消化细胞，加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。

2） 收集细胞悬液，1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。

3） 加入适量的预冷PBS或细胞裂解液（临用前加入蛋白酶抑1制剂）重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。

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12．水洗

用自来水流水冲洗约15min。使切片颜色变蓝（或放入碱性水中也可），但要注意流水不能过大，以防切片脱落。

13．分化

将切片放入1%盐酸乙醇液中褪色，约2秒至数十秒钟。见切片变红，颜色较浅即可。

14．*洗

切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。

15．脱水Ⅰ

切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各5min。

16、复染

用0.5%伊红乙醇液对比染色1-3min。

伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏1木1精染细胞核的浓淡相配合，如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。反之，如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。

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3. 洗涤

材料经固定后，PBS或双蒸水冲洗约3小时。（20，30，30，60）

4. 脱水

材料依次经80%、90%、100%、100%各级乙醇溶液脱水，各30min

注意事项：

（1）脱水必须在有盖的玻璃品中进行，****吸收空气中的水分。

（2）在更换高*的脱水剂时，BDNF ELISA*盒，****1好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高*脱水剂。

（3）在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使*变软，助长材料的解体。

（4）在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使*变脆，影响切片。

（5）如需过夜，应停留在80%酒精中。