辣根过氧化物酶是一种含亚铁血红素的蛋白质，HRP广泛分布于植物界，它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白，糖含量18％。HRP由多个同功酶组成，Mr在40000左右，等电点7.2。溶于水，溶解度为5%(W/V)，溶液呈棕红色，透明。酶催化的****适PH因供氢体不同而稍有差异，但多在pH5左右。酶溶于水和58％以下的*铵溶液。HRP可溶于0.58饱和度以下的*铵溶液，而0.62饱和度以上则不溶。该酶****适pH7.0(对愈创木酚为氢给体而言)。在室温下，HRP几周内稳定，加热到63℃，在15min内稳定。氧化还原电势很低，pH6.08时，E 0 =-0.2070V，pH为7.71时，E′0 =-0.2787V。HRP的辅基和酶蛋白****1大吸收光谱分别为403nm和275nm，一般以OD403nm／OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的纯度。

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将*1体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚本乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。3.　加酶标*1体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标*1体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。5.　终止反应：于各反应孔中加入2M*0.05ml。6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或****浅，依据所呈颜色的深浅，以“ ”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

　13、检测前，要打开酶1标仪，使之稳定10分钟以上。

　　14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。

　　15、待检样品要澄清，否则会影响结果。

　　16、温浴时间应遵守*盒规定。

　　17、应尽量做双孔实验，豚鼠elisa*盒，这样才能保证数据的准确性。

　　18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。

　　二、下面所提到的是针对我公司的ELISA产品会出现的问题及解决办法

　　1. 加入反应终止液后，没有吸光值或吸光值偏低。

　　a.原因：未加入酶标记物。

　　解决办法：请按照操作步骤进行。

　　b.原因：*盒内容物未能充分回。

　　解决办法：确定*盒内容物回温后再进行操作。

　　c.原因：室温太低。

　　解决办法：若室温太低(lt;19℃)，请于操作步骤4，适当延长温育时间。

　　d.原因：未使用*盒的清洗液清洗。

　　解决办法： 请用*盒内所提供的清洗液清洗。

　　e.原因：*盒已过有效期限。

　　解决办法：请更换成仍在有效期限内的*盒。