(1) 称取5mgHRP溶解于1ml蒸馏水中。1 U0 |) i L/ Y/ ?. ]

(2) 于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。: | }% L" N7 ?4 e2 g

(3) 将上述溶液装入透析袋中，对1mM PH4.4的醋1酸钠缓冲液透析，4℃过夜。

(4) 加20μl 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化桯RP的PH升高到9.0~9.5，然后立即加入10mg IgG(*1体，或*5mg)在1ml 0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时。9 U# ^amp; ~. [7 @

(5) 加0.1ml新配的4mg／ml NaBH4液，混匀，再置4℃2小时。# B T" n; v7 C" F* H5 }

(6) 将上述液装入透析袋中，对0.15M PH7.4 PBS透析，4℃过夜。0 m# a# G5 V# x， S7 p， B

　　其余步骤(纯化)同戊二1醛标记步骤的(6)、(7)、(8)。

3）结果判定：

　　除标记物IgG量的计算，略有不同以外，其余均同戊二1醛法。5 {% ^% U/ T X- Z0 U- a

　　IgG量(mg／ml)＝(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62( Q: p$ f" X， F0 }; s

4）*及器材:1 x- R T/ e$ i" Q

(1) 0.1M NaIO4：称取241mg高碘1酸钠(广州化学*厂，批号830602)溶于蒸馏水10ml中。

(2) 1mM PH4.4醋1酸钠缓冲液: ?. p" ﹨5 N) ?( K

　　 0.2M NaAc (1.361克／50ml) 3.7ml r% g; oamp; m2 r7 t4 O

　　 0.2M HAc (0.601ml／50ml) 6.3ml

　 　加蒸馏水至2，000ml。

(3) 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液:3 ?! ﹨$ z* p7 ]" gamp; X. E) z( f

　　　　　　　Na２CO３ 0.32克; s3 C. i! A5 q1 G/ w4 {

　　　　　　　NaHCO３ 0.586克: H% E M! O w- M

　　　　　　　加蒸馏水至50ml

　　再用蒸馏水作20倍稀释，即成0.01M PH9.5的碳酸盐缓冲液。

(4) NaBH４溶液(4mg／ml):

　　临用时称取NaBH４4mg溶于1ml蒸馏水中。 h( i* [6 J， H% T

(5) 其它的*及器材可参见戊二1醛标记法。

****组化染色

1. 石蜡切片，步骤同前。切片经贴片后，60℃烤片30min使蜡熔化，经二甲本Ⅰ、Ⅱ各10min，脱蜡。然后，将切片放入100%、95%、90%、80%、70%乙醇中3-5min，再放入蒸馏水中3min，水化。

2．脱蜡和水化后，用PBS(pH7.4，具体看所用*1体及染色*说明)冲洗3次，每次3分钟。洗瓶冲洗。

3. 根据*1体的要求，对**原进行相应的*。可选步骤，具体见*1体说明书。

4.每张切片加1滴或50μl 3%过1氧化氢，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3次，每次3分钟。此步骤是对内源性过氧化物酶含量高的*而言。

4. 除去PBS液，每张切片加1滴或50μl的**1体，室温下孵育60分钟或4℃过夜，具体参见每种*1体的说明书。PBS冲洗3次，每次3分钟。

　13、检测前，要打开酶1标仪，使之稳定10分钟以上。

　　14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。

　　15、待检样品要澄清，否则会影响结果。

　　16、温浴时间应遵守*盒规定。

　　17、应尽量做双孔实验，猴elisa*盒，这样才能保证数据的准确性。

　　18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。

　　二、下面所提到的是针对我公司的ELISA产品会出现的问题及解决办法

　　1. 加入反应终止液后，没有吸光值或吸光值偏低。

　　a.原因：未加入酶标记物。

　　解决办法：请按照操作步骤进行。

　　b.原因：*盒内容物未能充分回。

　　解决办法：确定*盒内容物回温后再进行操作。

　　c.原因：室温太低。

　　解决办法：若室温太低(lt;19℃)，请于操作步骤4，适当延长温育时间。

　　d.原因：未使用*盒的清洗液清洗。

　　解决办法： 请用*盒内所提供的清洗液清洗。

　　e.原因：*盒已过有效期限。

　　解决办法：请更换成仍在有效期限内的*盒。