液相色谱法概述
液相色谱根据分离机理的不同可分为:
?液固吸附色谱
?液液分配色谱
?离子交换色谱
?离子对色谱法
?分子排阻色谱(或凝胶渗透色谱)
(一)液-固吸附色谱
流动相为液体,固定相为固体吸附剂,根据物质吸附作用的不同来分离物质。
(二)液-液分配色谱
流动相和固定相都是液体的色谱法即为液-液色谱,是利用样品组分在两种不相溶的液相间的分配来进行分离。一种液相为流动相,另一种是涂于载体上的固定相。
流动相*性小于固定相*性的液-液色谱法称为正相分配色谱法。
流动相*性大于固定相*性的液-液色谱法称为反相分配色谱法。
(三)离子交换色谱
(四)离子对色谱法
(五)分子排阻色谱法
液相色谱仪常见故障解决方案
如何排除液相色谱仪气泡溢出的故障?
流动相内产生都无法清除不断产生的气泡,主要是因为过滤器长期沉浸于铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%溶液中12~36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,Shodex 糖柱价格,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被*,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0~3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯冲洗半小时即可。
液相色谱
HPLC对流动相的一般要求
流动相就比如*的血液,其质量直接影响到整个系统的正常运行与否。
应该使用HPLC级的溶剂,不能互相混溶的溶剂不可以直接切换!一般在水相和与其不混溶的溶剂切换时,广东Shodex 糖柱,使用异作为过渡溶剂。
注意溶剂的截止波长。截止波长是指该溶剂可以在紫外检测器中使用的低波长,低于该波长后,溶剂会有很强的紫外吸收,从而影响*限的稳定性、干扰对所分析物质的检测。
HPLC所使用的水必须是新鲜的和经过0.45μm滤膜过滤过的。建议每天更换新鲜的水。长期不用时,Shodex 糖柱价格,必须把使用水的管路用置换,防止长霉。
仪器使用完后要采用适当的溶剂冲洗等方法维护色谱柱和系统。如果使用了缓冲盐一定先将盐要冲洗干净。
仪器长期不用时,不建议使用纯封存。因为有生成聚合物的趋势。建议使用、/水或/水封存。
当有流路堵塞时,可以尝试将之反接后冲洗。污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将会缩短溶剂过滤器的使用寿命,并且影响泵和系统的的性能。这在水溶剂或*盐缓冲液(pH 4 至7) 中尤其如此。