杂交瘤-博特龙公司(图)

7.1.5 加二*

1. 每孔加 100 uL 二*。

2. 室温反应 1 小时。

3. 甩掉板中液体并拍净残液，洗板 3 次。

7.1.6 显色反应

1. 每孔加 100 uL 底物，室温反应 1~ 15 分钟。

2. 每孔加 50ul 终止液。

3. 测 OD 值，检测波长 450nm。

7.2 直接 ELISA

*原包被液：将*原稀释在 1X 包被液中，浓度 1～10μg/ml。

酶标*0体：稀释到 1X BSA 封闭液中，稀释度参考条件优化方法。

7.2.1 加*原

1. 在酶标板中每孔加入 100μl *原包被液。

2. 室温孵育 1 小时。

3. 甩掉板中液体并拍净残液，每孔加入洗涤液 200ul，洗涤 3 次并拍净残液。

7.2.2 封闭

1. 每孔加 200μ1X BSA 封闭液。

2. 37℃ 反应 45 分钟，甩掉板中液体并拍净残液，每孔加入洗涤液 200ul，洗涤 3 次并拍

净残液。

Hybridoma Feeder 添加因子是一种适应性培养基，可用于大鼠和小鼠单克0隆*0体制备过程中，例如，融合、亚克0隆以及新复苏细胞的培养等，具有明显的促进杂交瘤细胞生长的能力，可替代常规的饲养细胞。

相比饲养细胞，Hybridoma Feeder 添加因子具有如下特点：

1. 可以提高杂交瘤细胞的生长速度。

2. 用于新融合细胞，可使克0隆集落增多、*。

3. 杂交瘤亚克0隆时，可以提高亚克0隆效率。

4. 完全代替饲养细胞，避免污染，减少工作步骤。

7.1.1 包被*原

1. 加*原到酶标板中。

2. 室温孵育 1 小时。

3. 甩掉板中液体并拍净残液，每孔加入洗涤液 200ul，杂交瘤，洗涤 3 次并拍净残液。

7.1.2 封闭酶标板

1.加 200 uL 1X BSA 稀释/封闭液到每孔中。

2. 孵育 30-45 分钟， 甩掉板中液体并拍净残液，每孔加入洗涤液 200ul，洗涤 3 次并拍净

残液。

7.1.3 与含单克0隆*0体的培养液反应

1.每孔中加 100 uL 含单克0隆*0体的培养液。

2. 室温反应 1 小时.

3. 甩掉板中液体并拍净残液。

7.1.4 洗板

1. 加入 1X 洗涤液。

2. 甩掉板中液体并拍净残液。

3. 重复 3～5 次。