Elisa*盒——Elisa实验常见问题及解决方案
不正常的标准曲线
1 错误的方法重悬标准品 加入正确量的溶液重悬标准品,重悬充分
2 标准品稀释错误 按照说明书要求稀释标准品
3 标准品污染 使用一次性的灭菌吸头, 标准品贮存于2-8 ℃
4 错误的倍比稀释步骤 按照说明书倍比稀释标准品
5 波长选择错误 TMB为底物和以OPD为底物的*盒均有使用,而 前者比色波长为450nm,后者为492nm。双波长比色分析优于单波长。
6 标准品混用 不同批号*勿混用
7 *盒在运输途中时间太长,温度太高,标准品失活 尽量缩短运输时间,夏季应放冰块降温
8 ELISA未终止而直接检测450nm和620nm TMB显色需终止后检测,否则会出现620nm比450nm读数高的现象。(数值仍有梯度规律)
ELISA*盒的应用技术
ELISA检测*盒应用定性夹心检测技术,用合成的HEV多肽*原包被微孔板板条,这些多肽是中国型HEV毒株氨基酸序列中*原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM,这些就会与HEV 的多肽*原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性和样品中的其它成份。然后加入羊*人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与孵育结合上的HEV IgM相结合,玉米赤霉烯酮ELISA*盒价格,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入*溶液终止酶和底物间的反应,并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgMelisa*盒的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。
ELISA*盒——ELISA实验通用规则
1、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。