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*果蝇 MRJ 蛋白单克0隆*0体的制备和鉴定

摘要: 制备* 果 蝇 MRJ 蛋白单克0隆*0体可用于研究果蝇 mrj 的 生 物 学 功 能，使 用 IPTG 诱 导 重 组 质 粒pET28a-mrj 在大肠杆0菌 Rosetta 中表达，重组蛋白经过 Ni-IDA 凝胶柱亲和纯化后免0疫 BALB/c 小鼠。然后取免0疫好的小鼠的脾0脏细胞与小鼠骨0髓瘤细胞 SP2 /0 融合，经克0隆和筛选获得了能分泌*果蝇 MRJ 蛋白单克0隆*0体的杂交瘤细胞株。腹0水制备后获得单克0隆*0体，通过 ELISA 和 Western Blot 对所获得的*0体进行鉴定，结果表明所制备单克0隆*0体能够特异性结合于原核及真核细胞表达的 MRJ 蛋白，可用于研究 mrj *的生物学功能。

关键词: mrj; 细胞融合; 单克0隆*0体

甲胎蛋白(AFP)是一种胎儿特异性糖蛋白，铝佐剂，分子量约70，000～72，000道尔顿^，在胚胎肝0脏和卵黄囊中合成，正常人血中含量甚微。1972年有人首0次报道开放性神0经管畸形胎儿、羊水中有高水平的AFP。若胎儿羊水中AFI’值高于均值常见于患无脑儿或脊柱裂的胎儿，亦见于其他多种畸形，如先0天性shen病、食道或肠闭锁、囊0性水瘤、骶尾部畸胎瘤、Rh血型不和、先天愚型、先0天性性腺发育不全等。1983年发现母体血0清AFP水平的降低与唐氏综合征有密切关系一。因此制备高0效特异的AFP单克0隆*0体(McAb)具有重要的意义。

细胞融合

取已免0疫小鼠的脾0脏用不完全培养基制成细胞悬液，计数。收集选择生长状态良好的 SP2 /0 骨0髓瘤细胞，制成细胞悬液，计数。将 SP2 /0 骨0髓瘤细胞与免0疫小鼠的脾细胞以 1∶ 10 在 50% 的 PEG1500 作用下融合［8］。加 HAT 选择培养基重悬混匀后滴入到铺有饲养层细胞的 3 块 96 孔细胞培养板。放入37 ℃ ，含 5% 的 CO2 培养箱中培养。