脂质体转染*-博特龙(推荐商家)

【摘要】 目的建立一种快速制备甲胎蛋白单克0隆*0体(AFP—McAb)杂交瘤细胞系的方法。 方法 以常规和改良两

种方式同时免0疫8～12周Balb／c小鼠，取小鼠脾细胞与骨0髓瘤细胞SP2／0融合并行次黄*呤、氨基蝶呤与胸苷选择性培养。

用间接酶链免0疫吸附试验法(EI。ISA)筛选阳性克0隆株，并建立细胞系。 结果 在较短时间内，改良法能获得高0效价的免0疫

*0体，与常规免0疫法相比有*显著差异(Plt;0．001)，同时改良法的细胞融合率和*0体阳性率也显著高于常规免0疫法

(Plt;o．001)。筛选获得的高0效分泌*人AFP—McAb的阳性杂交瘤细胞珠进行了初步鉴定。 结论 新的改良方法优化了

常规的McAb制备中动物免0疫程序，并能成功筛选出AFP—McAb杂交瘤细胞系。

在McAb的研制过程中，脂质体转染*，动物免0疫是McAb制备过程中的关键步骤。但是传统动物免0疫方式通常需要二个月左右，不但耗时长，而且*原消耗的量大、对*原纯度要求高。本实验试图通过优化传统免0疫小鼠的方法，大大缩短动物免0疫时间并减少了*原的消耗量，为进一步组装患者肿0瘤组织及血0清中AFP水平检测的*盒打下良好的基础，为临床研究、肿0瘤的诊治提供更为有效的工具。

细胞融合

取已免0疫小鼠的脾0脏用不完全培养基制成细胞悬液，计数。收集选择生长状态良好的 SP2 /0 骨0髓瘤细胞，制成细胞悬液，计数。将 SP2 /0 骨0髓瘤细胞与免0疫小鼠的脾细胞以 1∶ 10 在 50% 的 PEG1500 作用下融合［8］。加 HAT 选择培养基重悬混匀后滴入到铺有饲养层细胞的 3 块 96 孔细胞培养板。放入37 ℃ ，含 5% 的 CO2 培养箱中培养。

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