旋转式细胞培养系统(以下简称RCCS)生物反应器是如何工作的?
RCCS生物器是由中心的一个同轴氧合器以及一个水平旋转培养皿所构成的。当培养皿充满培养基并且旋转时,培养基像固体一样围着水平轴旋转。氧合器与容器壁以相同的角速度旋转。这些条件使得培养容器内产生层流和*小的剪切力。细胞由离心力,重力和科式力作用而成悬浮状态,因此在RCCS生物反应器的细胞受到*的机械应力和高通量运输(营养物质,氧气等)因而能聚集形成类组织聚合物。气体传输通过硅树脂氧合器传输,从而避免气泡的形成和湍流。
RCCS旋转细胞培养系统是一款没有传统的机械搅拌装置来驱动的悬浮细胞的动态培养系统,RCCS系统配合HARV或者STLV的生物反应容器能够建立起一种没有机械搅拌装置*的、没有液体湍流的低剪切力培养环境。细胞悬浮于反应容器内部的培养液中并且随机地处于运动状态,什么叫3d细胞培养,可自由地生长、聚集并分化。同时,反应容器内外部通过反应容器内的氧合膜实现空气的交流,但反应容器内部的水分却能够不流出。
细胞传代的一般操作方法是在开始细胞传代前,仔细检查细胞传代所需的仪器和*是否齐全,一般主要有细胞(单层细胞,镜检适合)、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液)、庆大溶液(1 万单位)、7.5%NaHC03 溶液、0.25%胰蛋白酶、PBS 洗液等。工具有小方瓶(100m1)、克氏瓶、胶塞、吸管(10ml、1m1)、细胞吹打管(20 ml)(以上用具需经121℃至少15 分钟高压灭菌)、C02 孵箱、超净台、倒置显微镜、4℃、—20℃冰箱等;
操作步骤一般是镜检细胞,细胞培养,挑选生长状态良好,细胞界限清晰,3d细胞培养仪,具有立体感,形态好*、无异常及可X疑病变细胞。配制细胞培养液:按以下配比配制MEM-0.2%LH 培养液100ml 内,加入灭活小牛血X清10m1,庆大溶液0.3m1,7.5%碳酸氢钠溶液3ml。(仅供一般参考)。消化细胞;先用PBS 洗液冲洗细胞表面1-2 次,每次10m1,弃去洗液,向细胞瓶内加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,3d细胞培养小室,细胞瓶平放,使消化液完全覆盖细胞表面。至细胞完全脱落到胰酶中。每瓶加入10m1 细胞培养液吹打分散细胞,按所需的传代比例分装于小方瓶(100m1)中,再加入10m1 细胞培养液重复吹打一次后分装,然后补加至所需培养量。加塞,置于37±1℃孵箱培养。约2~4 天成片。(由细胞接种浓度决定);填写传代记录。
以上方法仅供参考!