弗氏完全佐剂-博特龙技术有限公司

1. 第21天按同样方式加强免0疫1针。备注：每次佐剂和*原现配现用。

2. 第35天采微量血进行ELISA测定，*0体滴度应在1:10000-1:10000000范围内，随后即可采全血或按常规方法进行*原冲击免0疫和脾细胞融合。

3. 若*0体滴度没有达到要求，可在第42天按同样方式加强免0疫1针。备注：通常情况下小鼠只需免0疫2针，而家兔往往需要免0疫3针。

4. 若免0疫3针，可在第52-56天采微量血进行ELISA测定，*0体滴度应在1:10000-1:1000000范围内，随后即可采全血或按常规方法进行*原冲击免0疫和脾细胞融合。备注：佐剂免0疫效果有时也与*原特性有关，若免0疫3针后仍达不到要求，不建议进行更多针次免0疫。

细胞融合

取已免0疫小鼠的脾0脏用不完全培养基制成细胞悬液，计数。收集选择生长状态良好的 SP2 /0 骨0髓瘤细胞，制成细胞悬液，计数。将 SP2 /0 骨0髓瘤细胞与免0疫小鼠的脾细胞以 1∶ 10 在 50% 的 PEG1500 作用下融合［8］。加 HAT 选择培养基重悬混匀后滴入到铺有饲养层细胞的 3 块 96 孔细胞培养板。放入37 ℃ ，含 5% 的 CO2 培养箱中培养。

使用方法

1. 用生理盐水将*原稀释到2倍*终浓度（按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl用量配制）。备注：推荐使用的*原用量为小鼠每针次10-20μg、家兔每针次20-50μg。

2. 用振荡器充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需用量（按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl）与*原按体积比1:1混合，并用振荡器剧烈振荡5-10min，直至静止放置10min水油相不分层。备注：与*原混合前佐剂分层属正常现象，但必须充分混匀后才能取用。

3. 通过皮下或肌肉单点注射免0疫动物，弗氏完全佐剂，小鼠每针次100μl，家兔每针次200μl。

（1）佐剂与*原混合后应尽快注射，若放置时间较长出现水油相分层，则必须按上述步骤2重新振荡混匀；

（2）抽入针管前应摇匀，抽入针管后应尽快注射；

（3）尽量选择引流淋巴0结附近（如腋窝和腹0股0沟附近）的皮下或肌肉进行免0疫。