样品如果溶解度太低如何上制备HPLC?
(1)了解一下样品的性质,根据其酸碱性,*性等性质,工业制备色谱系统价格,通过调节溶剂的pH值等,以达到较好的溶解度。
(2)样品可能某种晶型难溶,这样可以加入其他溶剂以助溶。
(3)不是一定要用流动相来溶解样品,对溶解度差的样品,山东工业制备色谱系统,可以选择甲醇,THF或DMSO等溶解样品。特别是DMSO,对一般的化合物溶解度都很好。并且在反相柱上不保留,不会造成干扰。而且DMSO的洗脱能力很弱,工业制备色谱系统费用,一般不会影响峰型。
(4)可以固体上样。
反相色谱分离后,如何快速从流动相中得到产品?
可以考虑先在低温下,减压旋蒸除去其中的有机的溶剂,然后用萃取的方法把产品萃取出来,工业制备色谱系统多少钱,然后再低温再旋蒸,这样,就可以不将温度升得很高而得到产品。如果要直接蒸掉流动相,水泵的真空度要注意(要检查气密性),否则蒸水会很慢。一般比较好的泵在60~70度即可蒸掉水,如果泵的真空度不好,可能需要80~90度才行,这样容易暴沸导致样品损失。温度太高可能引起物质变性。
如何用制备色谱柱制备低含量的杂质?
制备色谱柱为ZorbaxSB-C18 9.4*250mm及gilson馏分收集器,色谱仪为Agilent1100或LC-6A。想用其制备面积*化法含量为0.05%左右的杂质,初步提纯后用高分辨的LC-MS进行定性分析。如何设定色谱条件,如,流量、进样量、样品的浓度、切割点的设置、是否要浓缩,要求将95%以上的主峰切除。
(主峰后有二个杂质靠得很近。)
答:
1.制备用的流动相尽量等级高一点,否则流动相中的杂质会影响LC-MS分析。
2.使用馏分收集器时,延迟体积一定要计算准确,检测器的响应时间设到很小,否则都会影响收集的纯度和回收率。制备柱的流速一般与直径的平方成正比,如果4.6mm分析柱流速为1mL/min,9.4mm制备柱用1*(9.4/4.6)2,大约为4mL/min。进样量设到几个mg应该基本没有过载。进样样品浓度越高越好。假如进样10mg,理论计算0.05%的杂质大约只有5μg,显然浓度太低,尽量是多做几次,合并馏分然后浓缩后做LC-MS分析。