1、细胞准备:细胞传到后,密度达到70%左右时进行转染;
2、细胞转染:取两个EP管,一个加入Opti-MEM、核心质粒和包装质粒;另一个加入Opti-MEM、lipo2000,然后将两管混匀;
3、细胞孵育:将混合液逐滴加入细胞培养皿中,混匀后孵育;
4、收集病毒:转染后48h、72h收集含慢病毒的上清;
5、滴度检测:细胞为30%-50%时加入病毒上清液,检测阳性细胞比例。
腺相关病毒包装原理
腺相关病毒( adeno-associated virus, AAV)是一类细小病毒, 基铟组为单链DNA ,荧光定量pcr,对分裂细胞和非分裂细胞均具有gan染能力。通常需要腺病毒或疱zhen病毒帮助其在体内fu制扩增。重组腺相关病毒( recombinant AAV, rAAV )是利用AAV2型*组与不同xue清型的衣壳蛋白*组结合产生的混合体病毒载体,*检测多少钱,可将目的*的CDS区序列或者RNAi干扰序列插入rAAV表达质粒中,包装病毒后gan染细胞完成对目的*的操作。腺相关病毒具有gan染温和,免yi原性小,长效稳定表达的特点,主要应用于动物体内注射。源井生物提供的腺相关病毒颗粒经过超su离心纯化,并通过qPCR对病毒*拷贝进行滴定。腺相关病毒的滴度在10^12~10^13GC/ml ,可以满足各类整体实验的使用要求。
转录组重测序
转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有mRNA的总和。转录组研究是*功能及*结构等研究的基础,pcr,通过新一代高通量测序,能够快速的获得某一物种特定组织或在某一状态下的几乎所有转录本序列信息,pcr实验室,已广泛应用于临床诊断、基础研究和研发等领域。
转录组Resequencing针对的是有参考*组的物种。用新一代高通量测序技术对某物种的特定组织或细胞进行转录组测序,与参考*组比较,可以得到*表达差异、可变剪接、融合*等遗传调控信息。