很多实验的pH值设定在 7.4以模仿生物条件。假如你的蛋白在这个pH值下是稳定的,那就非常棒了!如果不是,就需要改变pH值找到目的蛋白在溶液中处于可溶性且不会降解的状态。
一个经验法则是:蛋白在它等电点pI附近的pH值溶液中会表现得不易溶解,高纯度氨*价格,因为蛋白在其等电点的pH值溶液中表面没有净电荷,现货氨*价格,从而容易聚集。这里推荐用Expasy的ProtParam工具快速简便地计算蛋白等电点pI值,揭阳氨*价格,只要提交蛋白序列即可。
20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的*钠水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套)
Tris本身呈碱性,只用Tris-HCl缓冲体系即可配制pH范围由酸性到碱性的缓冲液,方法也较为简单,而且还可以与其他物质组成多种缓冲体系;对生*学过程干扰很小,也不与钙、镁离子及*离子发生沉淀。但是,Tris缓冲液的pH值受溶液浓度和温度影响较大,稀释十倍,缓冲液的pH值变化大于0.1,温度每升高一度,pH值下降0.03;同时其易吸收空气中的CO2,所以配制的缓冲液要盖严密封。