10mg/ml牛蛋白(BSA):加100mg的牛蛋白(组分V或分子生物学*级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,
须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
三羟氨基CAS77-86-1,就是通常所说的Tris,也叫氨,是一种很常用的*,在工业合成、生化检测、生物制药领域都有广泛应用;在采样管病毒保存液中,属于其配置溶液的一种重要的原料。三羟氨基Tris分子结构中含有一个氨基和三个醇羟基,氨基和三个羟围绕中心碳原子形成类似的四面体结构。由于氨基的存在,Tris在水溶液中显弱碱性,氨基可作为配位基团和很多酸形成Tris盐,常见的有Tris-HCl,还有TEA、TEB、Tris甘氨酸、Tris*等。病毒保存液中用的原料Tris和EDTA,实际TE缓冲液就是Tris加EDTA。
Tris缓冲液是在生*学研究中使用较广泛的一种缓冲剂,其本身为弱碱,常用有效pH在“中性”范围,Tris-HCl缓冲液:pH=7.5~8.5;Tris-*盐缓冲液:pH=5.0~9.0。
Tris-HCl缓冲液优点
碱性较强,可以只用这一种缓冲液配置由酸到碱的范围pH缓冲液;
对生*学过程干扰很小,不与钙、镁离子及*离子发生沉淀。
Tris-HCl缓冲液缺点
pH受浓度影响较大,稀释10倍,高纯度三羟甲基*缓冲液,pH变化大于0.1
温度效应大,如4℃时pH=8.4,37℃时pH=7.4
易吸收空气中的二氧化碳
对某些pH电*有一定干扰作用,要使用与Tris溶液具有兼容性的电*