为啥用琼脂糖呢,因为他有很多优点奥!
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琼脂糖的凝胶性是由存在的氢键所致,凡是能*氢键的因素都能导致凝胶性的*。琼脂糖具有亲水性,并几乎完全不存在带电基团,电泳槽供应商,对敏感的生物大分子很少引起变性和吸附,是理想的惰性载体。天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含*根和羧基的强酸性多糖,电泳槽,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象,加之*根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。这也就是琼脂糖比琼脂贵那么多的原因了。
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一、操作步骤
1、首先将电泳槽内的凝胶转印夹及转印绵清洗干净备用,将转印膜放在缓冲液中浸泡。
2、打开转印夹,黑色一侧放在桌面上,将转印绵铺在透明的转印夹上,在转印绵上放上一张同样大小的滤纸,然后将经过电泳后的凝胶平铺在滤纸上,再将转印膜平铺在凝胶上,注意在凝胶和转印膜之间不能有气泡,然后在转印膜上放上一张同样大小的滤纸,之后再铺上另外一张转印绵,形成一个“三明治”结构(要保证转印绵、凝胶、滤纸和转印膜的大小尺寸一样),之后将转印夹合拢,用锁具将转印夹扣住,对另一个转印夹也做出同样的操作。
3. 将合拢后的转印夹垂直放入转印模块中,注意颜色的区分,转移夹板的黑色部分朝向转印模块黑色的一方,一定不能放反。
4. 将组装好的转印模块移入电泳槽壳内,倒入转移缓冲液,缓冲液应没过凝胶。
5. 选择合适的电泳电源并设好参数开始电泳,电泳结束后取
出转印膜即可,转印膜可使用真空干燥器进行干燥处理,电泳槽多少钱,干燥后的转印膜可以长久保存。
三、注意事项
本产品内安装的铂金丝电*易断,使用中应小心操作,铂金丝不在保修范围之内,提醒客户清洗电泳槽时细致观察小心触碰。
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蛋白电泳常见问题及解决方法:
一,条带出现“微笑”现象(中间凹下两边翘起)
主要是凝胶中间部分的凝固不均所致,多出现较厚凝胶中,应待凝胶充分凝固后再做后续操作。
二,条带出“皱眉”现象(中间凸起两边下垂)
两板之间底部气泡所致,应排除底部气泡。
三,条带出现“拖尾”现象
主要是样品溶解效果不佳;分离胶浓度过大;电泳缓冲液时间过长。
建议:加样前离心;选择合适的样品缓冲液,加适量样品促溶剂;重新配制电泳缓冲液;降低凝胶浓度。
四,电泳槽生产厂家,条带出现纹理现象
样品中不溶性颗粒引起的。
加样前离心,加适量样品促溶剂。
五,指示带已跑出板底,但样品条带还未跑下来
与缓冲液和分离胶浓度有关。
更换正确PH值的缓冲液,降低凝胶浓度。六,染色背景高,染色过程中*变为蓝色