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色谱分离法 (Chromatography),使溶液分批通过垂直的填充吸附剂固定床,将各种组分分离精制。色谱分离法 Chromatographic separation / Chromatography在工业上应用色谱分析原理分离性质近似组分的方法。使溶液分批通过垂直的填充吸附剂固定床,将各种组分分离精制。色谱柱内的填充吸附剂是多孔的惰性固体,用非挥发性的惰性液体涂渍。被分离溶液的溶质与惰性液体有大小不同的溶解度。如果被吸附的物质是气体,发生“吸收”现象。如果被吸附的物质是液体,发生“萃取”情况。分离系数取数聚决于分配系数的大小。
反相层析在吸附层析中,性物质在层析柱上吸附较牢,洗脱时发生拖尾现象和保留时间长的问题。如果在支持物上涂上一层高碳原子的疏水性强的烷烃类,洗脱液用*性强的溶剂,如和水的混合物。则被分离样品中的*性强的物质不被吸附,洗下来,得到较好的分离效果。这种层析法与普通的吸附层析法相反,故称为反相层析。用HPLC做反相层析常用的ODS柱,即在支持物的表面上连接了C18H37Si—基团。
同系层析在核酸分析中,将样品经核酸酶部分裂解成不同长度的核苷酸片段,用同位素标记后,在DEAE纤维素薄层上分离,制备液相,用含有未标记的相同的核苷酸片段作展层溶剂,这样,未标记的核苷酸把标记过的核苷酸推进,使按分子量大小不同把标记核苷酸片段,按由小到大的次序排列,达到分离的目的。于是把这种层析法称为同系层析。同系层析和电泳相结合曾用于寡核苷酸的顺序分析。
分配层析分离各种不同的化合物的本质是化合物在两相中的分配系数因为化合物结构不同而产生分配系数的差异。分配层析中纸层析滤纸选择: -般选择中速滤纸,以正J醇做展开剂,展开速度慢。以石油1醚做展开剂展开速度快。
离子交换层析:是以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行的一种层析方法。原理:依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化的。固定相是离子交换剂,由一类不溶于水的惰性高分子聚合物基质通过-定的化学反应共价结合上某种电荷基团形成。
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