磁珠偶联*蛋白*盒

*盒清单：

活化磁珠：保存于DMSO中，室温保存。

缓冲液A：偶联反应液，4度保存。

缓冲液B：封闭液， 用缓冲液A溶解的氨基配体（比如BSA、甘氨酸），浓度为20mg/ml，现配先用，自行配制。

缓冲液C：淋洗液，含有千分之一吐温20的PBS溶液，现配先用，自行配制。

缓冲液D：保存液，含有万分之五叠氮钠的PBS溶液，现配先用，自行配制。

*S：偶联****剂。

磁珠的预处理

磁珠已活化，保存在DMSO溶液里，请在偶联配体前，取出所需量的磁珠，用0.5ml缓冲液A淋洗磁珠，磁液分离去除上清，重复淋洗两次。

偶联配体（以*为例）

1.*的预处理: 如果*里含有其他氨基、巯基的杂质分子，需通过透析、G-25等手段将杂质分子去除，以免对*造成竞争性反应，(比如Tris，甘氨酸，BSA等);

2.将预处理好的磁珠10mg放入偶联反应瓶中，加入200ul缓冲液A，然后加入250ug-500ug的*（我们推荐磁珠量mg：*量mg=20:1，也可减少*用量)

注：为缩短偶联反应时间，可以加入*S，W（*S加入量）=0.185*V（步骤2的总体积ml）g

3.偶联反应：将偶联反应瓶拧紧放入恒温摇床中，恒温25度震荡6小时，保证震荡混匀，

****磁珠震荡过程中出现沉淀或者挂壁现象。.(可以将偶联反应时间延长到12小时达到更好的偶联效果);

4.封闭：向偶联反应瓶中加入400ul缓冲液B ，放入恒温摇床，25度震荡4小时，以封闭掉没有反应的活性基团;

5.偶联后磁珠的处理： 对偶联结束后的磁珠，必须要去除表面的非特异性结合和非共价键结合，分别用1ml缓冲液A和1ml缓冲液C，交替淋洗磁珠，磁液分离去除上清后，重复两次，以保证没有自由游离的配体。

6.磁珠的保存：用1ml缓冲液D淋洗磁珠，磁液分离后，去除上清，保存于缓冲液D中，于4度保存。

注意:

1.此操作方法可用于偶联单**或其他蛋白质。如果配体是氨基酸或者带有氨基、巯基、或羟基的小分子化合物，可以溶解在缓冲液A中偶联；

2.禁止使用带有氨基、巯基或羟基的缓冲盐作为缓冲液使用，比如：Tris

3.建议所有的*都经过高压灭菌后使用。