浸蜡、包埋
(1)使石蜡浸入*中,取代*中含有的透明剂。
(2)包埋:将浸蜡后的*置于融化的固体石蜡中,石蜡凝固后,*即被包在其中,称蜡块,此过程称为包埋。
切片和贴片
(1)修整蜡块:可视其*的大小,在*边缘约0.1~0.2cm处,切去余蜡部分,否则易造成*皱缩不平。
(2)准备好切片用具:切片刀、毛笔、*镊子(弯)、*烘温控仪
(3)安装蜡块:将修好的蜡块安装在金属或木制持蜡器上。
(4)安装切片刀:将切片刀安装在切片机的刀台上,把刀台上的紧固螺丝旋紧,使切片时不产生振动,能保持一定的切片厚度。
(5)切片的厚度:切片机的厚度调节器上刻有0~50μm或0~25μm,可任意选择其厚度,石蜡切片的厚度一般在4~6μm。
(6)切片
(7)铺片:用*镊子镊起蜡带轻轻平铺在40~45℃的水面上,借水的张力和水的温度,将略皱的蜡带自然展平。
(8)贴片、烘片:待切片在恒温水面上充分展平后,将蜡片捞到载玻片的中段处倾去载玻片上的余水,置入60~65℃恒温箱内或切片*烘温控仪的烘箱内烤片15~30分钟,脱去溶化*间隙的石蜡。
染色
冷却50~60℃加入甘油。
过夜后加入冰醋酸,暗处保存。配好的液体应是深紫色,发黑。在配好的Harris*素中,加入等量埃利希*素(埃利希*素配法:A:*精2g+无水酒精100ml+甘油100ml;B:钾明矾20g+蒸馏水100ml:A*醋酸5ml)。在*素的配制中加入埃利希*素作用明显,埃利希*素是自然氧化成熟溶液性质较稳定,它能成为Harris*素有效稳定剂,使溶液不易产生沉淀及氧化膜,避免沉淀、杂质对切片尤其是对细胞核的污染,达到了稳定助溶、均匀着色的效果;因其缓慢不断补充发色基和助色基,能有效控制因Harris*素老化、染色力降低的问题,大大延长了*素的使用寿命,平均使用寿命为Harris*素的2倍。这两种*素起到了优势互补的作用,既能保证染色速度和对*的选择性能,同时又克服了传统Harris*素****易形成沉淀、易老化的缺点。通过对以上关键环节的改良,HE染色质量明肝炎PT、APTT、TT延长,FIB降低不明显。
烤片
烤片的温度也很重要,我院病理科采用将切片置 于温度设置为80℃的烤箱中,20min,这样不会引起*收缩,也不会出现脱片。
染色
*素是世界上****的常规细胞核染料。其配方 很多,Harris配方****常用。此液的优点是配后即可使用,染色力强,但其****易形成沉淀,易老化的缺点也不容忽视。本室经过长期实践,改良了染液的配制****了HE染色质量。改进 Harris配法总结出以下几点:(1)将*铝钾容于蒸馏水中,加 热使之完全溶解,每克*精加10g*铝钾加热煮沸2分钟。(2)拿离火源后迅速投入****钠0.1g,摇匀冷却(****钠加速氧化,缩短配液过程)。