固定
(1)小块*固定法:这是****常用的方法,从*或动物体取下的小块*,须立即置入液态固定剂中进行固定,通常,标本与固定液的比例为1:4~20,但*块不宜过大过厚,否则固定液不能迅速渗透。故取*块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。
(2)注射、灌注固定法:某些*块由于体积过大或固定液****难渗入内部,或需要对整个脏器或整个动物体进行固定。这时宜采用注射固定或灌注固定法。将固定液注入血管,经血管分支到达整个*和全身,从而得到充分的固定。
(3)蒸汽固定法:比较小而厚的标本,可采用*或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片,则应在血片未干燥前采用*或甲醛蒸汽接触固定。
****常用的固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。
展片与捞片
展片水温应在42℃至47℃之间,这主要和包埋蜡的熔点有关,水温过高,会引起*细胞散开,水温过低,切片皱摺无法摊平。包埋蜡中如有*,也会造成石蜡溶解现象。而用一次性刀片切的片子,一碰到热水,片子上的皱摺就无法再展开,这有二个方法可以解决:****、可以在切片时边切边向蜡片吹气,这样的片子就会非常平整,放到热水里就会自然展开,比较方便快捷,但这样的片子会略微厚一点;第二、在切完片子后,先把切片放在30%酒精水溶液中,让酒精的张力自动把皱摺展开,然后再将切片移到热水,这样的片子会较薄;如酒精浓度过高,容易引起切片*碎,出现裂隙,像脂肪之类细胞间粘附性较小的*一碰到酒精就会散开,故不能用此法。****后捞片时玻片要干净,要选择那些完整、无皱摺的切片,粘贴于玻片中1/3和下1/3的中间。
烤片和脱蜡
烤片,一般在60℃的温箱内烤片0.5~1小时左右,温度过高,会引起切片细胞收缩;时间太短(少于20分钟),容易造成脱片。脱蜡也相当重要,如果脱蜡不干净,切片不易着色或着色不匀,所以,脱蜡用的*要经常更换,一般用3道*,每500ml液体,处理500张切片后更换一次为宜。当室温低于18℃时,必须将切片从温箱拿出后立即放入*中脱蜡,或将*放入温箱内预热(37℃左右)脱蜡,****高不得超过60℃。然后经高浓度的酒精到低浓度的酒精洗去*,至水。